Ensayos de enlace competitivo de alto rendimiento para el objetivo de estructuras terciarias de ARN con moléculas...

Área de la Ciencia:

• La bioquímica
• Biología molecular
• Descubrimiento de drogas

Sus antecedentes:

• La identificación de moléculas pequeñas que se unen a estructuras terciarias complejas de ARN (por ejemplo, pseudonodos, cuádruplexos G) es crucial para el desarrollo de nuevas terapias.
• Los métodos de cribado existentes a menudo carecen del rendimiento o la especificidad requeridos para objetivos complejos de ARN.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar y validar un ensayo antisenso de unión competitivo de alto rendimiento para la identificación de ligandos de estructuras terciarias de ARN.
• Demostrar la versatilidad del ensayo aplicándolo tanto a los riboswitches bacterianos como a las estructuras de ARN viral.

Principales métodos:

• Se diseñó un ensayo de unión competitivo donde los ligandos potenciales compiten con un oligonucleótido antisentido etiquetado para unirse a una estructura de ARN etiquetada.
• El ensayo fue inicialmente personalizado para el pseudonodo de riboswitch PreQ1-I y validado utilizando ligandos y análogos conocidos.
• El ensayo se adaptó posteriormente a una estructura G-cuadruplex del SARS-CoV-2 y se probó con ligandos G-cuadruplex conocidos.

Principales resultados:

• El ensayo identificó con éxito un compuesto de éxito (4494) de una pantalla de biblioteca contra el riboswitch de Fusobacterium nucleatum, que inhibió la traducción.
• Aunque la actividad del golpe fue atribuida a un contaminante, resaltó la alta sensibilidad del ensayo.
• El ensayo fue validado para las estructuras G-cuadruplex del SARS-CoV-2, lo que demuestra su amplia aplicabilidad.

Conclusiones:

• El ensayo antisenso de unión competitivo es una herramienta sensible y versátil para descubrir ligandos dirigidos a diversas estructuras terciarias de ARN.
• Este ensayo amplía las metodologías disponibles para el descubrimiento de fármacos dirigidos al ARN.
• Los hallazgos facilitan el desarrollo de nuevas terapias al permitir una detección eficiente de moléculas de unión al ARN.