Desarrollo y validación de un método LC-MS/MS para la medición del porfobilinógeno en la orina

Área de la Ciencia:

• La bioquímica
• Química analítica
• Diagnóstico clínico

Sus antecedentes:

• La medición del porfobilinógeno urinario (PBG) es crucial para el diagnóstico de la porfiria aguda, un trastorno de la biosíntesis del hemo.
• Los métodos existentes pueden carecer de la sensibilidad requerida para una atención óptima del paciente.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar y validar un ensayo de espectrometría de masas en tándem (LC-MS/MS) de cromatografía líquida sencillo y sensible para la GPC urinaria.
• Establecer intervalos de referencia para la GPC en las colecciones de orina aleatorias y de 24 horas.

Principales métodos:

• Las muestras de orina se añadieron con un estándar interno marcado con isótopos estables.
• El PBG se extrajo mediante extracción en fase sólida por intercambio aniónico.
• El análisis se realizó mediante cromatografía de fase inversa con detección por espectrometría de masas (tiempo de inyección a inyección de 5,5 minutos).

Principales resultados:

• El ensayo LC-MS/MS demostró una alta recuperación (99,7%) y una baja imprecisión (< 16%).
• El límite de cuantificación fue de 0,1 μmol/L, y el límite superior de linealidad fue de 100 μmol/L.
• Los intervalos de referencia establecidos para las colecciones aleatorias de orina y de 24 horas mostraron tasas de positividad comparables a los métodos espectrofotométricos.

Conclusiones:

• El método LC-MS/MS desarrollado es específico y sensible para el análisis de GPC urinaria en muestras sanas y patológicas.
• Se establecieron intervalos de referencia para la recolección de orina aleatoria y de 24 horas.
• El rendimiento clínico del ensayo fue evaluado con éxito.