Avanzar en la producción de anticuerpos recombinantes en E. coli: optimización de la expresión y la purificación a...

Área de la Ciencia:

• Biotecnología
• Ingeniería de Bioprocesos
• Biología molecular

Sus antecedentes:

• La fermentación por lotes alimentados es crucial para los altos títulos de proteínas recombinantes en el bioprocesamiento.
• El monitoreo en tiempo real de la expresión de proteínas es desafiante, lo que dificulta la optimización del proceso.
• La determinación precisa de la alimentación, la inducción y el momento de la cosecha es crítica pero difícil.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un sensor en línea para el seguimiento en tiempo real de la expresión de anticuerpos recombinantes en Escherichia coli.
• Para utilizar la fluorescencia GFP como un sustituto confiable para el rendimiento de proteínas periplásmicas.
• Optimizar los procesos de fermentación de los lotes alimentados permitiendo una identificación precisa del punto de cosecha.

Principales métodos:

• Construcción de un sistema de promotor dual para la expresión simultánea de GFP y anticuerpos recombinantes.
• Integración de un LED azul y una cámara Raspberry Pi para la detección de fluorescencia.
• Cuantificación de la fluorescencia del GFP y correlación con los niveles de expresión de anticuerpos.

Principales resultados:

• La fluorescencia de GFP se correlacionó con precisión con la expresión de Fab y nanobody a lo largo del tiempo.
• El sensor demostró una sensibilidad comparable a la de los sensores PMT y fotodiodo.
• La tasa de cambio en la fluorescencia de GFP (dGFP/dt) predijo efectivamente los puntos óptimos de cosecha.

Conclusiones:

• El sensor GFP desarrollado permite el monitoreo en tiempo real y la optimización de la producción de proteínas recombinantes.
• Esta herramienta ayuda a minimizar los tiempos de incubación excesivos y a reducir la fuga de proteínas.
• La estación de sensores imprimible en 3D es valiosa tanto para la optimización de procesos industriales como para la educación en ingeniería de bioprocesos.