Eficacia de unión de CAR e interacciones fuera del objetivo para los reactivos comunes de detección de CAR

Área de la Ciencia:

• La inmunoterapia
• Tratamiento celular
• Citometría de flujo

Sus antecedentes:

• La terapia con células T del receptor de antígeno quimérico (CAR) es una inmunoterapia innovadora.
• La expansión de las terapias CAR-T requiere nuevos antígenos tumorales y CAR en otras células inmunes como los macrófagos y las células NK.
• Los reactivos de detección específicos son cruciales para interrogar la expresión superficial del CAR a medida que evoluciona el campo.

Objetivo del estudio:

• Compare los reactivos de detección de CAR disponibles en el mercado para detectar construcciones de CAR con diferentes bisagras, enlaces y diseños de scFv.
• Evaluar las interacciones fuera del objetivo de estos reactivos dentro de una matriz de células mononucleares de sangre periférica (PBMC).

Principales métodos:

• Se utilizó citometría de flujo para analizar los reactivos de detección de CAR.
• Reactivos probados en líneas celulares CAR-Jurkat estables y en células CAR-T humanas primarias.
• Evaluación del rendimiento del reactivo en una matriz PBMC para identificar la unión fuera del objetivo.

Principales resultados:

• Los reactivos basados en anticuerpos mostraron especificidad y señal en células CAR-T y líneas de Jurkat.
• La proteína L detectó solo CARs basados en scFv anti-CD20, con tinción fuera del objetivo en PBMCs.
• Los antígenos recombinantes dieron resultados limpios para CD19 y BCMA, pero no para CD20.
• Los conjugados de anticuerpos mostraron posibles falsos positivos en los PBMC debido a la unión al receptor Fc.

Conclusiones:

• Los anticuerpos idiotipos del CAR, los antígenos recombinantes y los anticuerpos del antienlace proporcionan una detección específica del CAR.
• Los anticuerpos idiotipos y los antígenos recombinantes están limitados a antígenos específicos.
• Los anticuerpos anti-linker permiten la detección universal del CAR independientemente del antígeno objetivo.