La activación de CRISPR para reparar las anomalías del ECG causadas por una variante truncante de FLNC en ratones

Área de la Ciencia:

• Genética cardiovascular
• Terapia génica
• Cardiología molecular

Sus antecedentes:

• Las variantes truncantes en el gen Filamin C (FLNCtv) causan cardiomiopatías hereditarias (DCM/NDLVC) con alto riesgo de muerte súbita cardíaca.
• Los tratamientos actuales para la cardiomiopatía inducida por FLNCtv son limitados, sin terapias genéticas específicas disponibles.
• La activación de CRISPR (CRISPRa) presenta una estrategia terapéutica potencial para genes grandes como el FLNC, superando las limitaciones de la terapia de reemplazo génico.

Objetivo del estudio:

• Evaluar la eficacia de la activación de CRISPR mediante el virus adeno-asociado (AAV) en el tratamiento in vivo de la cardiomiopatía inducida por FLNCtv.
• Establecer y caracterizar un modelo de ratón que imite las variantes patógenas humanas de FLNCtv.

Principales métodos:

• Se generó un modelo de ratón de eliminación de exón 15 de FLNC heterocigota (FLNC-Ex15del/wt) para imitar el FLNCtv humano.
• Desarrolló un sistema AAV-CRISPRa específico para el corazón (dSaCas9-VP64) administrado sistémicamente.
• Expresión cardíaca FLNC evaluada (qRT-PCR, Western blot) y función eléctrica cardíaca (ECG, desafío de flecainida) antes y después del tratamiento.

Principales resultados:

• Los ratones FLNC-Ex15del/wt mostraron anomalías en el ECG y susceptibilidad a las arritmias inducidas por flecainida, con reducción del ARNm y de la proteína FLNC.
• El sgRNA y el andamio optimizados en las células HL-1 lograron una regulación al alza del FLNC de hasta 1,8 veces.
• El tratamiento con AAV-CRISPRa restauró el ARNm FLNC a niveles de tipo salvaje, aumentó la amplitud del QRS y evitó por completo las arritmias.

Conclusiones:

• El modelo de ratón FLNCtv recapitula parcialmente las anomalías eléctricas humanas, ayudando a los estudios de la patogénesis de la enfermedad.
• Este estudio proporciona la primera evidencia in vivo de la eficacia de CRISPRa-AAV en el tratamiento de la miocardiopatía por haploinsuficiencia hereditaria.
• La activación del gen CRISPRa-AAV puede revertir la disfunción eléctrica después de la aparición de la enfermedad, abriendo vías para el tratamiento de trastornos cardíacos debido a una dosis genética insuficiente.