Método LC-MS/MS para cuantificar el anticuerpo PGT 121.414.LS ampliamente neutralizador del VIH-1 en suero humano

Área de la Ciencia:

• Inmunología
• Química analítica
• Farmacología

Sus antecedentes:

• La cuantificación precisa de los anticuerpos ampliamente neutralizantes del virus de la inmunodeficiencia humana 1 (VIH-1) en suero es esencial para los ensayos clínicos.
• La espectrometría de masas de cromatografía líquida en tándem (LC-MS/MS) está emergiendo como una alternativa viable a los ensayos de unión de ligando para la medición de anticuerpos terapéuticos.

Objetivo del estudio:

• Validar un método dirigido LC-MS/MS para cuantificar el bNAb PGT 121.414.LS en suero humano.
• Establecer un ensayo fiable para los estudios farmacocinéticos y farmacodinámicos de PGT 121.414.LS en el tratamiento y la prevención del VIH-1.

Principales métodos:

• Purificación no específica seguida de un análisis de LC-MS/MS dirigido mediante Orbitrap y espectrometría de masas triple cuádruple.
• La validación incluyó evaluaciones de linealidad, reproducibilidad, precisión, efectos de matriz, integridad diluyente y estabilidad.
• Se utilizó la precipitación de sulfato de amonio para la purificación, con péptidos estables etiquetados con isótopos como estándares internos.

Principales resultados:

• El método validado demostró curvas de calibración lineales de 10 a 500 μg/mL con un límite inferior de cuantificación (LLOQ) de 10 μg/mL.
• Las muestras de control de calidad cumplían con los criterios de aceptación ICH M10, lo que indica una alta precisión y reproducibilidad.
• El ensayo mostró un traslado mínimo, una interferencia negligible y se evaluaron los efectos de la matriz, la estabilidad y la integridad diluyente.

Conclusiones:

• El ensayo LC-MS/MS desarrollado cuantifica con precisión la PGT 121.414.LS en suero humano dentro del rango de concentración terapéutica esperado.
• Este método proporciona una herramienta sólida para el monitoreo de los niveles de PGT 121.414.LS en estudios clínicos para la prevención y el tratamiento del VIH-1.
• El ensayo validado apoya el desarrollo clínico de PGT 121.414.LS al permitir evaluaciones farmacocinéticas y farmacodinámicas precisas.