Cromatografía preparativa de intercambio aniónico a base de colina para el enriquecimiento de cápsidas virales...

Área de la Ciencia:

• Biotecnología
• Terapia génica
• Fabricación biofarmacéutica

Sus antecedentes:

• Los vectores de virus adenoasociados recombinantes (AAV) son cruciales para la terapia génica, pero enfrentan desafíos de producción.
• La fabricación produce diversos grupos de cápsidos, incluidos los cápsidos vacíos no funcionales, que son impurezas relacionadas con el producto y pueden desencadenar respuestas inmunes.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar y optimizar un nuevo proceso de cromatografía por intercambio aniónico (AEX) para el enriquecimiento completo de cápsidos de virus adeno-asociados (AAV) de alta pureza.
• Mejorar la separación de viriones AAV funcionales de capsidos vacíos, mejorando la seguridad y eficacia de los productos de terapia génica.

Principales métodos:

• Se desarrolló un nuevo proceso de cromatografía de intercambio aniónico (AEX) que utiliza un gradiente de sal de colina-Cl.
• El proceso se optimizó utilizando pasos de elución específicos para el serotipo AAV8 después de un paso de captura de afinidad.
• La eficiencia de purificación se evaluó utilizando la relación A260/A280, el AEX analítico y la cromatografía de exclusión de tamaño con dispersión de luz multiángulo (SEC-MALS).

Principales resultados:

• El método AEX basado en colina logró casi el 90% de la separación completa de la cápside AAV8 en una sola ejecución de pulido.
• Este nivel de pureza es comparable al obtenido por ultracentrifugado por gradiente y cumple las normas reglamentarias.
• La nueva estrategia mejora significativamente la separación de los vectores virales funcionales de las cápsidas vacías.

Conclusiones:

• Una estrategia de cromatografía de intercambio aniónico basada en colina ofrece un método eficaz para purificar los cápsidos completos del virus adeno-asociado (AAV).
• Este enfoque apoya el desarrollo y la fabricación de productos de terapia génica puros, seguros y potentes basados en AAV.
• El método descrito ofrece una alternativa viable para obtener vectores AAV de alta pureza para aplicaciones clínicas.