Mejora de la producción de ácidos grasos libres en Rhodotorula toruloides utilizando el editor de bases basado en...

Área de la Ciencia:

• Microbiología
• Biología sintética
• Biotecnología

Sus antecedentes:

• * Rhodotorula toruloides es una levadura valiosa para producir sustancias químicas como los ácidos grasos.
• Las herramientas genéticas limitadas han restringido su potencial de ingeniería metabólica.
• * La edición genética eficiente es crucial para desbloquear las capacidades de R. toruloides.

Objetivo del estudio:

• * Desarrollar y validar un editor de bases de citidina (CBE) basado en CRISPR/Cas para R. toruloides.
• * Establecer la edición múltiple de genes y el reciclaje de marcadores para la ingeniería iterativa.
• * Diseñar R. toruloides para mejorar la producción de ácidos grasos libres.

Principales métodos:

• * Desarrollo de un editor de bases de citidina basado en CRISPR/Cas (CBE) para la edición de bases de C a T en R. toruloides.
• * Integración de un sistema inducible Cre-loxP para el reciclaje de marcadores de selección.
• * Aplicación de la EBC para alteraciones de genes individuales y múltiples, incluidos los genes implicados en el metabolismo de los lípidos.

Principales resultados:

• * Se logró una eficiencia de interrupción de un solo gen de hasta el 90% utilizando el sistema CBE.
• * Se ha demostrado la interrupción paralela exitosa de cuatro genes con una eficiencia del 5%.
• * Habilitado el reciclaje de marcadores de selección con una eficiencia superior al 70% y cepas uracil-auxotróficas construidas.
• * Diseñado una cepa que produce 512,3 mg/L de ácidos grasos libres al interrumpir los genes del metabolismo lipídico.

Conclusiones:

• * El sistema CBE desarrollado es una herramienta de edición del genoma precisa y específica para R. toruloides.
• * Este conjunto de herramientas amplía significativamente las capacidades de ingeniería genética para R. toruloides.
• * El estudio allana el camino para mejorar la ingeniería metabólica y la producción química en R. toruloides.