Protocolo para la obtención rápida de imágenes tridimensionales de 5 plexos y el análisis de una sola célula de las...

Área de la Ciencia:

• Inmunología
• Biología celular
• Microscopía

Sus antecedentes:

• Los ganglios linfáticos son cruciales para las respuestas inmunes adaptativas, apoyando las reacciones del centro germinal para la maduración de la afinidad de los anticuerpos y la diferenciación de las células plasmáticas.
• Comprender la dinámica celular dentro de los ganglios linfáticos es esencial para diseccionar las respuestas inmunes a la vacunación y la infección.

Objetivo del estudio:

• Para presentar un protocolo para imágenes 3D rápidas, de alta resolución y multicolor de ganglios linfáticos enteros de ratones inmunizados.
• Para permitir un análisis detallado de la resolución de una sola célula de las poblaciones clave de células inmunes dentro del microambiente de los ganglios linfáticos.

Principales métodos:

• El protocolo incluye la inmunización de ratones, la recolección de ganglios linfáticos, la fijación de tejidos, la permeabilización, la tinción fluorescente multicolor y la limpieza de tejidos.
• La adquisición de imágenes 3D de alta resolución se realiza utilizando un microscopio de fluorescencia de lámina de luz.
• El análisis de imágenes se lleva a cabo utilizando un software especializado (Imaris) para la cuantificación.

Principales resultados:

• El protocolo facilita el procesamiento rápido y la obtención de imágenes de ganglios linfáticos enteros.
• Las imágenes 3D multicolor de alta resolución permiten una localización espacial precisa y la cuantificación de tipos específicos de células.
• El método permite contar con precisión las células B del centro germinal, las células plasmáticas y las células T foliculares a nivel de una sola célula.

Conclusiones:

• Este protocolo proporciona una herramienta poderosa para estudiar la arquitectura celular y las interacciones de las células inmunes dentro de los ganglios linfáticos.
• Permite el análisis cuantitativo de actores celulares clave en la inmunidad adaptativa, el avance de la investigación en inmunología y el desarrollo de vacunas.