Detección rápida y sin amplificación de uropatógenos basada en ARN con LbuCas13a

Área de la Ciencia:

• Biotecnología
• Diagnóstico molecular
• Microbiología

Sus antecedentes:

• Necesidad urgente de diagnósticos rápidos de infecciones bacterianas en situaciones de emergencia.
• Los métodos actuales como los cultivos bacterianos (24-72 horas) y la PCR (varias horas) requieren mucho tiempo.
• La tecnología CRISPR ofrece una solución potencial para la detección más rápida de patógenos.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar y validar una plataforma de detección rápida de ARN bacteriano utilizando la tecnología CRISPR.
• Lograr un tiempo de orina-resultado inferior a 1 hora para la identificación bacteriana.
• Evaluar la compatibilidad del ensayo con la orina humana y su rendimiento diagnóstico en infecciones del tracto urinario (ITU).

Principales métodos:

• Los experimentos CRISPR se realizaron como ensayos de lector de placas de formato abierto con lecturas fluorescentes.
• Los estudios de derivación incluyeron la inyección de *Escherichia coli* 16S rRNA en la orina humana para determinar la compatibilidad del ensayo y el límite de detección.
• Los estudios de validación utilizaron orina cruda derivada del paciente para evaluar la concordancia del ensayo con el diagnóstico de ITU.

Principales resultados:

• El ensayo CRISPR demostró un límite inferior de detección de aproximadamente 10^6 copias/μL en la orina humana.
• La sensibilidad global fue del 75% para las infecciones urinarias combinadas Gram-negativas y Gram-positivas.
• Cuando se utilizó postanalíticamente con el análisis de orina convencional, el esquema de diagnóstico combinado logró una especificidad del 100% y un valor predictivo positivo, con resultados en menos de 1 hora.

Conclusiones:

• Se ha demostrado la viabilidad de un ensayo CRISPR sin amplificación para la detección rápida de uropatógenos.
• Esto representa la primera herramienta basada en ARN para la detección de uropatógenos.
• El ensayo puede mejorar la especificidad del diagnóstico de la infección urinaria cuando se utiliza postanalíticamente con el análisis de orina convencional; el trabajo futuro tiene como objetivo mejorar la sensibilidad y diferenciar los patógenos de los contaminantes.