Prueba de flujo lateral de amplificación de la polimerasa de recombinación inversa para la detección de...

Área de la Ciencia:

• Virología
• Biología molecular
• Entomología de la salud pública

Sus antecedentes:

• Los ortoflavivirus son virus transmitidos por artrópodos que causan enfermedades humanas graves como el dengue y el Zika.
• Los métodos de detección existentes pueden carecer de capacidad de despliegue en el campo para múltiples especies de ortoflavivirus.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un sistema de detección simple y desplegable en el campo para múltiples especies de ortoflavovirus patógenos.
• Utilizar la técnica de amplificación de la polimerasa recombinasa (RPA) para mejorar el diagnóstico.

Principales métodos:

• Evaluación de los primers ampliamente específicos existentes para el género Orthoflavivirus.
• Diseño y ensayo de un nuevo par de primeras (FlaviPath-F/FlaviPath-R) en un ensayo RPA.
• Optimización del protocolo RPA para la sensibilidad y la especificidad frente a los ortoflavivirus patógenos.

Principales resultados:

• Los primers FlaviPath-F/FlaviPath-R detectaron el 36% de los ortoflavivirus patógenos objetivo sin reactividad cruzada con las cepas no patógenas.
• Amplificación exitosa de oligonucleótidos de ADN de los virus del dengue, la encefalitis japonesa, el Zika y el Nilo Occidental.
• Detección positiva en muestras de mosquitos infectados con virus del dengue y del Zika, que demuestran una alta sensibilidad (potencialmente detección de una sola copia de ARN).

Conclusiones:

• Este estudio presenta el primer método basado en RPA para la detección de múltiples ortoflavivirus en mosquitos vectores.
• La plataforma RPA de transcripción inversa con dipsticks de flujo lateral (RT-RPA-LFD) es una herramienta rápida y rentable para la vigilancia arboviral.
• Esta técnica sirve como un prometedor sistema de alerta temprana para las amenazas arbovirales emergentes.