Método azul metileno/verde metileno basado en HPLC para la medición precisa del sulfuro de hidrógeno en el plasma

Área de la Ciencia:

• La bioquímica
• Química analítica
• Fisiología

Sus antecedentes:

• El sulfuro de hidrógeno (H2S) es un gasotransmisor endógeno crucial involucrado en las funciones cardiovasculares, neurológicas y metabólicas.
• La medición precisa del H2S circulante es difícil debido a su naturaleza volátil, reactiva y fácilmente oxidable.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar y validar un método sensible, reproducible y compatible para cuantificar el H2S plasmático.
• Establecer una plataforma confiable para la medición de H2S aplicable a diversos entornos de investigación.

Principales métodos:

• Desarrollo de un método de cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) basado en el azul de metileno que incorpora el verde de metileno como referencia interna (MBMG).
• Establecimiento de una curva estándar lineal para el hidrosulfuro de sodio (NaHS) de 0,05 a 10 μM.
• Evaluación de la sensibilidad, la reproducibilidad, la especificidad y la estabilidad del método.

Principales resultados:

• El método MBMG demostró la linealidad y cuantificó con éxito niveles significativamente diferentes de H2S en plasma entre los ratones de tipo salvaje (WT) y los ratones con knockout CSE (KO).
• Las pruebas de especificidad mostraron una interferencia mínima de otras especies de azufre, y solo los niveles suprafisiológicos de cisteína causaron una señal insignificante.
• Las muestras post-reacción mostraron estabilidad durante al menos seis meses a -80°C, permitiendo el almacenamiento a largo plazo y el análisis remoto.

Conclusiones:

• El método MBMG proporciona un enfoque práctico y sensible para la cuantificación confiable de H2S en plasma.
• Este método validado es adecuado para una amplia aplicación en la investigación básica, traslacional y clínica que investiga la fisiología y la fisiopatología de H2S.