Detección rápida y sencilla de Listeria monocytogenes utilizando una amplificación isotérmica real mediada por...

Área de la Ciencia:

• Biología molecular
• Seguridad de los alimentos
• Pruebas de diagnóstico

Sus antecedentes:

• Listeria monocytogenes es un patógeno importante transmitido por los alimentos que requiere métodos eficaces de detección.
• Los métodos actuales de detección pueden carecer de la rapidez o simplicidad necesarias para una vigilancia generalizada.
• Los diagnósticos rápidos y precisos son cruciales para la protección de la salud pública.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un nuevo ensayo de amplificación isotérmica cerrado mediado por mancuernas (CDA) para la detección de Listeria monocytogenes.
• Establecer una herramienta de diagnóstico rápida, sencilla, sensible y específica para L. monocytogenes.
• Evaluar el potencial de la CDA para la vigilancia de patógenos tanto en el laboratorio como en el lugar.

Principales métodos:

• Desarrolló un ensayo de amplificación isotérmica mediado por mancuernas cerrado (CDA) dirigido al gen hly de L. monocytogenes.
• Se utilizó el monitoreo de fluorescencia en tiempo real y el análisis de la curva de fusión para la detección.
• Azul hidroxi-naftol (HNB) incorporado para la detección colorimétrica visual del punto final.
• Se validó el ensayo utilizando 560 muestras de ADN para evaluar la especificidad y la sensibilidad.

Principales resultados:

• El ensayo O-CDA de L. monocytogenes demostró un límite de detección de 1 copia/μl.
• La fluorescencia en tiempo real y el análisis de la curva de fusión proporcionaron un diagnóstico rápido y preciso, comparable al qPCR.
• El ensayo colorimétrico basado en HNB mostró sensibilidad, especificidad y precisión equivalentes para el potencial de vigilancia in situ.
• El ensayo demostró ser eficaz en varios tipos de muestras.

Conclusiones:

• El ensayo basado en CDA desarrollado es un método rápido, simple, confiable y sensible para la detección de L. monocytogenes.
• La CDA de fluorescencia en tiempo real es adecuada para el diagnóstico de laboratorio.
• El CDA colorimétrico basado en HNB es prometedor para la vigilancia de patógenos en el sitio.
• Estos métodos CDA ofrecen un enfoque mejorado para gestionar el monitoreo de L. monocytogenes.