Edición genética altamente eficiente del virus del herpes felino 1 utilizando CRISPR/Cas9 combinado con FACS

Área de la Ciencia:

• Virología
• Biología molecular
• Ingeniería genética

Sus antecedentes:

• El herpesvirus felino 1 (FHV-1) causa enfermedades respiratorias y oculares significativas en los gatos.
• Los métodos convencionales para generar FHV-1 recombinante requieren mucho tiempo y son difíciles debido al gran genoma de ADN del virus.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un método rápido y eficiente para generar virus FHV-1 recombinantes.
• Utilizar la edición de genes CRISPR/Cas9 y FACS para una modificación y aislamiento viral precisos.

Principales métodos:

• CRISPR/Cas9 se utilizó para interrumpir los genes de la timidina quinasa (tk) y la glicoproteína E (gE) en el FHV-1.
• Se insertaron genes monoméricos de cerezo (mCherry) y de proteína fluorescente verde (GFP) en los loci del gen objetivo.
• Se empleó la clasificación celular activada por fluorescencia (FACS) para enriquecer y aislar poblaciones virales recombinantes.

Principales resultados:

• Generación exitosa de virus FHV-1 recombinantes con genes tk y gE interrumpidos, marcados por mCherry y GFP.
• Demostración de CRISPR/Cas9 que permite modificaciones genómicas precisas y específicas del sitio en el FHV-1.
• FACS aisló efectivamente las cepas virales recombinantes deseadas.

Conclusiones:

• La estrategia integrada de CRISPR/Cas9 y FACS reduce significativamente el tiempo de generación de FHV-1 recombinante de semanas a días.
• Este enfoque ofrece una herramienta poderosa para avanzar en la genómica funcional del FHV-1 y acelerar el desarrollo de vacunas.
• El método proporciona una plataforma simplificada para la manipulación genética de grandes virus de ADN.