Interferencia de CRISPR en una cepa de tipo 17 de secuencia multilocal de Streptococcus agalactiae

Área de la Ciencia:

• Microbiología
• La genética
• Enfermedades infecciosas

Sus antecedentes:

• El estreptococo del grupo B (GBS) es una de las principales causas de la meningitis bacteriana neonatal.
• Las cepas hipervirulentas del serotipo III, tipo de secuencia 17 (ST-17), como la COH1, están fuertemente relacionadas con la enfermedad neonatal grave.
• La manipulación genética de las cepas de ST-17 GBS es difícil, lo que dificulta la investigación de los factores de virulencia.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un sistema de interferencia CRISPR (CRISPRi) para la eliminación del gen objetivo en la cepa ST-17 GBS COH1.
• Permitir la genómica funcional y el cribado de alto rendimiento de los factores de virulencia del SGB.
• Para facilitar la investigación de la patogénesis del SGB en la barrera hematoencefálica.

Principales métodos:

• Desarrollo de un sistema de interferencia CRISPR (CRISPRi) utilizando Cas9 catalizador inactivado (dCas9) en la cepa COH1 GBS.
• Confirmación de la eficacia del sistema mediante ensayos de hemólisis, qPCR y modelos de infección in vitro con células endoteliales del cerebro humano.
• Eliminación dirigida de los genes de virulencia clave, incluidos pilA, srr2 y iagA.

Principales resultados:

• Implementación exitosa de un sistema CRISPRi sintonizable en el ST-17 GBS COH1.
• Se ha demostrado la eliminación fenotípica de los genes esenciales de virulencia del SGB.
• Se redujo la adhesión bacteriana, la invasión y las respuestas inflamatorias en la barrera hematoencefálica.

Conclusiones:

• El sistema CRISPRi desarrollado proporciona una plataforma versátil para la eliminación rápida de genes en ST-17 GBS.
• Esta herramienta supera los desafíos anteriores de manipulación genética en COH1.
• Permite la investigación avanzada sobre la patogénesis del SGB y las interacciones huésped-patógeno en la barrera hematoencefálica.