Pruebas simplificadas basadas en CRISPR para la detección y el subtipo de la gripe aviar

Área de la Ciencia:

• Biología molecular
• Virología
• Salud pública

Sus antecedentes:

• Los virus de la gripe aviar (VIA) representan una amenaza zoonótica significativa con potencial pandémico.
• Los métodos de diagnóstico actuales para los AIV a menudo requieren muchos recursos, lo que limita su aplicación en el campo.
• Existe una necesidad crítica de herramientas de diagnóstico rápidas, sensibles y específicas para la vigilancia del VIA.

Objetivo del estudio:

• Adaptar y validar la plataforma SHINE basada en CRISPR para la detección y el subtipo de virus de la gripe aviar.
• Desarrollar ensayos SHINE para linajes específicos de AIV, incluidos los subtipos H5 y H7.
• Proporcionar una solución de diagnóstico desplegable en el campo para la vigilancia AIV.

Principales métodos:

• Extensión de la plataforma SHINE basada en CRISPR para la detección de AIV.
• Diseño, optimización y validación de ensayos SHINE para la detección de AIV H5 con fluorescencia y lecturas de flujo lateral.
• Desarrollo de ensayos SHINE específicos para el linaje A ((H5N1) 2.3.4.4b y el linaje H7 de Eurasia.

Principales resultados:

• Los ensayos SHINE demostraron una especificidad del 100% en comparación con la PCR en muestras clínicas.
• Se alcanzó un límite de detección de 121,7 copias/μL para H5 AIV.
• Ensayos diseñados y validados con éxito para linajes específicos de AIV, incluidos los relevantes para los brotes actuales.

Conclusiones:

• La plataforma SHINE ofrece un método sensible, específico y rápido para la detección y el subtipo de AIV.
• Los ensayos SHINE son adecuados para el despliegue en entornos de bajos recursos, mejorando la vigilancia global de AIV.
• Este enfoque basado en CRISPR proporciona una herramienta valiosa para gestionar las amenazas de la gripe aviar.