Detección rápida, sensible y visual del rotavirus porcino con RPA-CRISPR/Cas13

Área de la Ciencia:

• Virología veterinaria
• Diagnóstico molecular
• Tecnología CRISPR

Sus antecedentes:

• El rotavirus porcino (PoRV) causa enteritis viral significativa en lechones, lo que tiene un impacto en la industria porcina.
• Los métodos de detección actuales como la RT-qPCR son complejos y dependen del equipo, lo que limita la aplicación en el campo.
• Hay necesidad de herramientas de diagnóstico rápidas y accesibles para la vigilancia del PoRV.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar una nueva plataforma de detección rápida y visual para el rotavirus porcino (PoRV).
• Crear una herramienta de diagnóstico rentable e independiente del equipo para entornos con recursos limitados.
• Proporcionar un método fiable para el diagnóstico precoz y los estudios epidemiológicos del PoRV.

Principales métodos:

• Desarrollo de un sistema de detección basado en CRISPR/Cas13.
• Integración de la amplificación de la recombinasa polimerasa (RPA) y la transcripción de T7.
• Utilizó la actividad de trans-clivado CRISPR con salida de señal de fluorescencia para la detección.

Principales resultados:

• La plataforma logró una detección altamente sensible y específica del PoRV dirigido al gen VP6.
• El límite mínimo de detección fue de 10^1 copias/μL para los plásmidos estándar.
• La validación clínica con 62 muestras mostró resultados consistentes con la RT-qPCR, confirmando la aplicabilidad clínica.

Conclusiones:

• La plataforma CRISPR/Cas13 desarrollada permite una detección de PoRV simple, intuitiva y rentable.
• Esta tecnología es adecuada para el cribado de campo rápido en áreas con recursos limitados.
• Ofrece un valioso apoyo para el diagnóstico precoz y la investigación epidemiológica del PoRV.