[Método a gran escala para el enriquecimiento e identificación de N-glicopéptidos en muestras de plasma a...

Área de la Ciencia:

• Proteómica y glucosciencia
• Descubrimiento de biomarcadores
• Espectrometría de masas

Sus antecedentes:

• La proteómica plasmática es crucial para identificar los biomarcadores de la enfermedad.
• La proteína N-glicosilación es vital en los procesos biológicos y la patogénesis de las enfermedades.
• El enriquecimiento eficiente de N-glicopéptidos a partir de plasma limitado es un reto debido a la abundancia de no-glicopéptidos.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar una estrategia sensible para el perfil completo de N-glicopéptido en trazas de plasma.
• Para superar las limitaciones en el análisis N-glicoproteómico actual de pequeños volúmenes de muestras.
• Permitir el descubrimiento robusto de biomarcadores para aplicaciones de medicina de precisión.

Principales métodos:

• Cromatografía líquida de interacción hidrófila optimizada (HILIC) para el enriquecimiento de N-glicopéptido.
• Se utilizó un enfoque de espectrometría de masas (MS) de doble plataforma que combinaba Tims TOF Pro 2 y Orbitrap Lumos.
• Optimización sistemática de los gradientes de fase estacionaria y de elución HILIC para mejorar la especificidad y la recuperación.

Principales resultados:

• Se identificaron 2.962 N-glicopéptidos intactos de 20 μg de péptidos plasmáticos (0,5 μL de plasma entero).
• Se ha alcanzado un nuevo punto de referencia en la sensibilidad para los N-glicoproteómicos plasmáticos de microvolumen.
• Se ha demostrado una alta especificidad y una cobertura completa de los sitios de glicopéptido y las composiciones de glicano.

Conclusiones:

• El flujo de trabajo desarrollado proporciona un marco analítico sólido para la N-glicoproteómica plasmática.
• Permite estudios clínicos a gran escala y el descubrimiento de biomarcadores a partir de volúmenes mínimos de plasma.
• Avanza significativamente la aplicación de los N-glicoproteómicos en la medicina de precisión y el diagnóstico.