Desarrollo de un ensayo serológico basado en liposomas para las variantes del SARS-CoV-2 con énfasis especial en las...

Área de la Ciencia:

• Bioconjugación Química
• Diagnóstico inmunológico
• Tecnología de los liposomas

Sus antecedentes:

• La conjugación de proteínas con liposomas es crucial para el bioanálisis y la administración de fármacos.
• La cuantificación de los anticuerpos neutralizantes del SARS-CoV-2 requiere métodos de ensayo robustos.
• Las variaciones en las secuencias de proteínas Spike en las variantes de preocupación (VoC) plantean desafíos para la detección de anticuerpos.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar y validar un ensayo sustituto basado en liposomas para cuantificar los anticuerpos neutralizantes del SARS-CoV-2.
• Investigar el impacto de las diferentes composiciones químicas de acoplamiento en la funcionalidad de las proteínas y la antigeneidad de las variantes del SARS-CoV-2.
• Establecer una plataforma versátil para la inmovilización de proteínas dirigida al sitio en los liposomas.

Principales métodos:

• Inmovilización dirigida al sitio de las variantes de proteínas de picos (RBD) del SARS-CoV-2 en los liposomas utilizando estrategias de etiqueta Cys-terminal y etiqueta Avi-terminal.
• Comparación de la química EDC/NHS con la biotinilación específica del sitio y la conjugación neutravidina-liposoma.
• Validación del ensayo de liposomas con una prueba de neutralización de pseudovirus utilizando sueros de pacientes.

Principales resultados:

• La química estándar de acoplamiento EDC/NHS dio lugar a una pérdida significativa de funcionalidad para diferentes variantes de la proteína Spike.
• La biotinilación específica del sitio y la inmovilización en los liposomas de neutravidina restauraron la funcionalidad de la proteína y mejoraron la estabilidad de almacenamiento en todas las variantes.
• El ensayo de liposomas desarrollado demostró una alta correlación con las pruebas de neutralización de pseudovirus e identificó patrones de neutralización diferenciales para las variantes Alpha/Delta y Omicron.

Conclusiones:

• Los liposomas de neutravidina ofrecen una plataforma versátil para la inmovilización de proteínas dirigida al sitio, independiente de las variaciones de la secuencia de proteínas.
• Este enfoque mejora la estabilidad y la funcionalidad de las proteínas, lo cual es crucial para el desarrollo de ensayos diagnósticos.
• La tecnología de ensayo de liposomas adaptable se puede aplicar a diversas proteínas y péptidos para aplicaciones de diagnóstico.