Desarrollo de clones infecciosos que expresan GFP para el PRRSV utilizando la clonación TAR para el cribado de...

Área de la Ciencia:

• Virología
• Biología molecular
• Descubrimiento de drogas

Sus antecedentes:

• El virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRSV) es un patógeno porcino significativo.
• Los virus de la familia Arteriviridae plantean desafíos para la salud y la producción de cerdos.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un método eficiente para generar el PRRSV infeccioso y la expresión génica extraña utilizando la clonación TAR.
• Para examinar la eficacia de los antivirales del SARS-CoV-2 contra el PRRSV y comprender la base estructural de la actividad.

Principales métodos:

• La clonación por recombinación asociada a la transformación de levaduras (TAR) para la ingeniería del PRRSV.
• La detección antiviral del PRRSV mediante el uso de compuestos como la ribavirina, el remdesivir y el molnupiravir.
• El análisis estructural predicho por AlphaFold de la polimerasa del PRRSV y la comparación con las polimerasas del SARS-CoV-2.

Principales resultados:

• Generación eficiente de clones infecciosos de PRRSV y GFP.
• Identificación de las secuencias reguladoras de la transcripción esenciales para la expresión génica extraña.
• Ribavirina, remdesivir y GS-441524 mostraron una potente inhibición del PRRSV; molnupiravir había reducido su eficacia.
• AlphaFold reveló una estructura de polimerasa conservada entre el PRRSV y el SARS-CoV-2, lo que explica la actividad del inhibidor cruzado de la familia.
• Divergencia estructural de la proteasa correlacionada con la ineficacia de GC376.

Conclusiones:

• La clonación TAR es una herramienta valiosa para la ingeniería de los arterivirus, incluido el PRRSV.
• Las percepciones estructurales explican la eficacia antiviral diferencial entre virus relacionados.
• Los hallazgos apoyan aplicaciones potenciales en el desarrollo de vectores de vacunas basados en PRRSV.