Protocolos optimizados para el aislamiento simultáneo de células endotelial microvasculares cerebrales primarias y neuronas primarias de alta pureza y maduración funcional de ratones recién nacidos individuales

Área de la Ciencia:

• La neurociencia
• Biología celular
• Biotecnología

Sus antecedentes:

• Los métodos actuales de aislamiento de unidades neurovasculares requieren animales separados, lo que dificulta el análisis simultáneo de la interferencia neurovascular.
• Esta limitación impide el estudio de las interacciones dentro de contextos genéticos y fisiológicos idénticos.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un nuevo método para el aislamiento simultáneo de tejido neural y segmentos microvasculares de ratones individuales.
• Permitir el análisis simultáneo de la interferencia neurovascular en contextos genéticos/fisiológicos idénticos.
• Proporcionar una plataforma confiable para modelar las interacciones neurovasculares en la enfermedad.

Principales métodos:

• Digestión enzimática y técnica de gradiente de densidad de albúmina sérica bovina para el aislamiento simultáneo.
• Cultivo de neuronas corticales primarias y cultivo de BMEC utilizando métodos específicos de recubrimiento y digestión.
• Cuantificación de la pureza celular, la funcionalidad del BMEC (TEER, tubulogénesis, secreción de NO) y las características neuronales (morfología, secreción de neurotransmisores, sensibilidad a la OGD).

Principales resultados:

• Se aislaron con éxito células endotelial microvasculares cerebrales primarias de alta pureza y neuronas corticales.
• Los BMEC primarios demostraron características funcionales que incluyen adherencia, tubulogénesis y disminución de la secreción de TEER/ NO después de la privación de oxígeno y glucosa (OGD).
• Las neuronas corticales primarias mostraron morfología característica, arborización de neuritas y mayor sensibilidad a la OGD, con niveles alterados de GABA.

Conclusiones:

• La plataforma desarrollada aisla de manera confiable las BMECs funcionales primarias y las neuronas corticales de ratones individuales.
• Este enfoque de un solo ratón elimina los factores de confusión genética, reduce el tiempo de procesamiento y aumenta la pureza.
• El método ofrece una fidelidad sin precedentes para modelar las interacciones neurovasculares en contextos de enfermedad.