Análisis de fluorescencia de una sola célula de la dinámica de la composición de las gotas de lípidos durante el...

Área de la Ciencia:

• Biología celular
• La bioquímica
• Biología molecular

Sus antecedentes:

• Las gotas lipídicas (LD) son cruciales para el metabolismo lipídico celular y el equilibrio energético.
• Comprender la heterogeneidad de composición de las LD en las células vivas es un desafío significativo en la biología celular.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar una nueva sonda fluorescente para visualizar y cuantificar la composición de las gotas de lípidos.
• Investigar los factores que regulan la heterogeneidad de las gotas lipídicas y su papel en la lipofagia.

Principales métodos:

• Desarrollo de LipiPB Red, una sonda fluorescente de emisión roja con alta sensibilidad a la polaridad y fotostabilidad.
• Aplicación de microscopía de imagen fluorescente durante toda la vida (FLIM) con LipiPB Red para analizar las LD en células de hepatoma.
• Inhibición genética y farmacológica de la lipasa triglicérida adiposa (ATGL) y co-imagen con marcadores de autofagia.

Principales resultados:

• LipiPB Red permitió la discriminación entre el triacilglicerol (TAG) y el diacilglicerol (DAG) dentro de las DL individuales.
• Se observó una heterogeneidad de composición significativa entre las LD en las células de hepatoma.
• La inhibición de la ATGL eliminó la heterogeneidad de la LD y aumentó la vida de la fluorescencia, implicando a la ATGL en la regulación de la diversidad de la LD.
• Las vidas de fluorescencia reducidas en LD dentro de los autofagosomas/autolisosomas sugieren que la hidrólisis lipídica precede a la fusión lisosómica durante la lipofagia.

Conclusiones:

• LipiPB Red es una herramienta valiosa para estudiar la composición y la dinámica de LD.
• La lipólisis mediada por ATGL es un regulador clave de la heterogeneidad de las gotas de lípidos.
• La hidrólisis lipídica se inicia antes de la fusión lisosómica en la vía de la lipofagia.