Uso combinado de PfAGO e LbCas12a de ingeniería para la detección de ácidos nucleicos

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular; Biotecnología; Diagnóstico de Enfermedades Infecciosas

Sus antecedentes:

• La pandemia de COVID-19 destacó la necesidad de métodos avanzados de detección de ácidos nucleicos. Las tecnologías existentes a menudo carecen de la velocidad, sensibilidad o accesibilidad requeridas para un uso generalizado.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar y validar NAEPLS (Nucleic Acid Detection Based on Engineered PfAgo and LbCas12a with Split crRNA), una plataforma de diagnóstico novedosa. Lograr la detección ultrasensible y específica de ARN de SARS-CoV-2 para mejorar el diagnóstico.

Principales métodos:

• Integración de PfAgo de Pyrococcus furiosus de ingeniería (mPfAgo) con el sistema CRISPR-Cas12a. Utilizó la capacidad de escisión de ARN de mPfAgo y la compatibilidad de crRNA dividido de LbCas12a. Combinado con la amplificación por polimerasa de transcriptasa inversa y recombinasa (RT-RPA) para una mayor sensibilidad.

Principales resultados:

• NAEPLS detectó ARN de SARS-CoV-2 con un límite de detección (LOD) de 10 copias/mL cuando se acopló con RT-RPA. Demostró especificidad de un solo nucleótido, distinguiendo mutaciones clave como D614G y S371P. Logró una concordancia del 100% con RT-qPCR en muestras clínicas (Ct 20-39), incluidas cargas virales bajas (Ct > 35).

Conclusiones:

• NAEPLS representa un enfoque transformador para el diagnóstico de ácidos nucleicos, fusionando la precisión de PfAgo con la amplificación CRISPR. La compatibilidad de la plataforma con tiras de flujo lateral permite pruebas rápidas en el punto de atención (POCT), especialmente en áreas con recursos limitados. Esta tecnología ofrece capacidades de detección de patógenos de alto rendimiento y desplegables en campo.