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Pinching-off of Coated Vesicles01:32

Pinching-off of Coated Vesicles

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Vesicle budding is orchestrated by distinct cytosolic proteins such as adaptor proteins, coat proteins, and GTPases. To initiate vesicle budding, membrane-bending proteins containing crescent-shaped BAR domains bind to the lipid heads in the bilayer and distort the membrane to form a protein-coated vesicle bud. Adaptors proteins such as AP2 for clathrin-coated vesicles can nucleate on the deformed membrane. Finally, coat proteins such as clathrin or COPI and COPII assemble into a coat forming...
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Aishwarya Makam1, Vishnu Ramadas1, Anly Tollan1

  • 1Cell Metabolism Lab (GA-08), Department of Developmental Biology and Genetics (DBG), Indian Institute of Science (IISc), Bengaluru 560012, India.

STAR protocols
|December 12, 2025
PubMed
Resumen

Este estudio presenta un nuevo algoritmo de procesamiento de imágenes para analizar la exocitosis en células de islotes pancreáticos humanos. El método mejora la detección de vesículas pequeñas, superando los desafíos de imagen para la investigación de alto rendimiento.

Palabras clave:
Biología celularMetabolismoMicroscopía

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Área de la Ciencia:

  • Biología Celular
  • Biofísica
  • Técnicas de Microscopía

Sus antecedentes:

  • La exocitosis en células de islotes pancreáticos humanos es difícil de estudiar debido al pequeño tamaño de las vesículas y la imagen inconsistente.
  • Los métodos existentes carecen de eficiencia para analizar grandes conjuntos de datos.

Objetivo del estudio:

  • Desarrollar y validar un novedoso algoritmo de procesamiento de imágenes para detectar y analizar la exocitosis en células de islotes pancreáticos humanos.
  • Proporcionar un protocolo robusto para la investigación de microscopía de alto rendimiento.

Principales métodos:

  • Preparación de muestras para células de islotes pancreáticos.
  • Microscopía de Fluorescencia de Reflexión Interna Total (TIRF) para la obtención de imágenes.
  • Algoritmo de procesamiento de imágenes basado en el seguimiento de partículas lagrangianas para el análisis computacional.

Principales resultados:

  • El algoritmo detecta y analiza con éxito la exocitosis, incluso con tamaños de vesícula pequeños.
  • Se logró la validación utilizando modelos matemáticos, esferas de TetraSpeck e imágenes celulares.
  • El protocolo demuestra aplicabilidad a otros procesos celulares y maneja grandes conjuntos de datos de manera eficiente.

Conclusiones:

  • El algoritmo y el protocolo desarrollados ofrecen un método fiable para estudiar la exocitosis en células de islotes pancreáticos.
  • Este enfoque es valioso para avanzar en la microscopía de alto rendimiento en la investigación celular.
  • El método proporciona una base para futuras investigaciones sobre la dinámica de las vesículas.