Protocolo para microscopía de nanoescala 3D multicolor STED sub-10 nm utilizando sondas orgánicas de molécula pequeña

Área de la Ciencia:

• Microscopía
• Biotecnología
• Imagenología Óptica

Sus antecedentes:

• La microscopía de expansión (ExM) mejora la resolución de los especímenes mediante el agrandamiento físico.
• La microscopía de depleción por emisión estimulada (STED) ofrece alta resolución pero está limitada en profundidad.
• La integración de técnicas avanzadas es crucial para la obtención de imágenes biológicas más profundas y de mayor resolución.

Objetivo del estudio:

• Presentar un protocolo para la integración de sondas orgánicas de molécula pequeña (SMOPs) y óptica adaptativa (AO) en la microscopía STED de expansión (ExSTED).
• Lograr una resolución sub-10 nm a profundidades de 10-50 μm en especímenes biológicos.
• Proporcionar un flujo de trabajo para la obtención de imágenes 3D de alta resolución de estructuras celulares y tisulares.

Principales métodos:

• Desarrollo de protocolos para el diseño, síntesis y etiquetado celular de SMOPs.
• Procedimientos de tinción multicolor y expansión celular.
• Implementación del flujo de trabajo de imagen STED corregido por óptica adaptativa.

Principales resultados:

• Integración exitosa de SMOPs y AO en la microscopía ExSTED.
• Se logró una resolución sub-10 nm a profundidades de 10-50 μm.
• Se demostraron capacidades de imagen 3D de alta resolución para estructuras celulares y tisulares.

Conclusiones:

• El protocolo desarrollado permite una resolución y profundidad sin precedentes en la obtención de imágenes biológicas.
• Este enfoque de microscopía ExSTED es valioso para el análisis estructural detallado de células y tejidos.
• El protocolo facilita la investigación avanzada en biología celular y neurociencia.