Desarrollo de un Inmunoensayo de Flujo Lateral Sensible Utilizando Fragmentos de Cadena Sola Variable de Conejo...

Área de la Ciencia:

• Biotecnología
• Inmunotecnología
• Ciencia de Materiales

Sus antecedentes:

• Los inmunoensayos de flujo lateral (LFIA) son cruciales para el diagnóstico rápido en el punto de atención.
• La inmovilización tradicional de anticuerpos en membranas de nitrocelulosa (NC) tiene limitaciones.
• Se necesitan estrategias de inmovilización mejoradas para mejorar el rendimiento de los LFIA.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar una plataforma LFIA innovadora utilizando fragmentos de anticuerpos genéticamente fusionados con proteínas de unión a NC (NBP).
• Mejorar la estabilidad y orientación de la inmovilización de anticuerpos en membranas de NC.
• Mejorar la sensibilidad y reproducibilidad de los LFIA.

Principales métodos:

• Cribado de 21 NBPs candidatas, identificando la lactoferrina (LF) como superior.
• Construcción y expresión de proteínas de fusión de fragmentos de cadena variable-LF (scFv-LF).
• Utilización de injerto de regiones determinantes de complementariedad (CDR) para variantes de scFv-LF.
• Evaluación del rendimiento en ensayos de dot blot, ELISA y flujo lateral.

Principales resultados:

• La lactoferrina demostró una adsorción robusta y estable en las membranas de NC.
• Las proteínas de fusión scFv-LF mostraron una alta actividad de unión al antígeno en un amplio rango de pH.
• Las variantes de scFv-LF con injerto de CDR (por ejemplo, B1R/C2R) mejoraron significativamente la actividad del antígeno y la intensidad de la señal.
• La fusión scFv-LF B1R/C2R logró un límite de detección 100 veces menor para la proteína nucleocápside del virus de la gripe B.

Conclusiones:

• La plataforma de fusión scFv-LF permite la inmovilización estable y orientada de anticuerpos en membranas de NC.
• Este enfoque mejora sustancialmente la sensibilidad y reproducibilidad de los LFIA.
• La estrategia modular de injerto de CDR facilita la personalización rápida para diagnósticos de próxima generación.