SlipChip basado en códigos de barras para cuantificación digital multiplexada y de trazas de muestras con sensibilidad femtomolar | JoVE Visualize

Área de la Ciencia:

Biotecnología; Desarrollo de Ensayos; Descubrimiento de Biomarcadores

Sus antecedentes:

ELISA digital mejora la sensibilidad de detección de biomarcadores de proteínas.; Los métodos actuales de ELISA digital luchan con la multiplexación de objetivos de baja abundancia en muestras traza.; Se necesita una mayor multiplicidad y sensibilidad de detección para muestras biológicas complejas.

Objetivo del estudio:

Desarrollar una plataforma ELISA digital simple, el SlipChip Integrado con Códigos de Barras (BIS-chip), para la identificación ultrasensible y multiplexada de proteínas a partir de muestras traza.; Mejorar la multiplicidad y la sensibilidad de detección más allá de las tecnologías ELISA digitales existentes.; Validar la aplicabilidad clínica del BIS-chip para diagnosticar afecciones como las reacciones liquenoides orales (RLO).

Principales métodos:

El BIS-chip utiliza un método de carga en dos pasos para garantizar la especificidad de la detección de objetivos 10-plex.; La alta eficiencia de carga de microesferas mejora la sensibilidad del ensayo para cada objetivo.; Se cuentan las señales digitales "Activadas" y "Desactivadas" para cuantificar 10 citoquinas con límites de detección (LoD) de femtogramos por mililitro (fg/mL).

Principales resultados:

El BIS-chip logró una mejora de sensibilidad de varios órdenes de magnitud en comparación con la tecnología estándar de matriz de suspensión multiplexada.; Se midieron simultáneamente 10 citoquinas de 20 μL de plasma intralesional de pacientes con OLR.; Los algoritmos de aprendizaje automático respaldaron el desarrollo de modelos de diagnóstico de OLR con un 95,7 % de sensibilidad y un 100 % de especificidad.

Conclusiones:

El BIS-chip ofrece una multiplicidad de detección excepcional y una ultrasensibilidad para el análisis cuantitativo de biomarcadores de baja abundancia en muestras traza.; Su flujo de trabajo sencillo proporciona una solución innovadora para diagnósticos clínicos desafiantes.; El BIS-chip demuestra un potencial significativo para avanzar en el análisis de biomarcadores en diversas aplicaciones biológicas y clínicas.