Un ensayo rápido para la detección de ARN del VHC utilizando RT-LAMP acoplado a una estrategia basada en...

Área de la Ciencia:

• Diagnóstico molecular
• Detección de ARN viral
• Pruebas en el punto de atención

Sus antecedentes:

• El diagnóstico actual del virus de la Hepatitis C (VHC) se basa en pruebas de anticuerpos y ARN, lo que provoca abandonos en la atención.
• Las pruebas de ARN del VHC existentes son lentas, caras y tienen disponibilidad limitada.
• Necesidad de una detección rápida y rentable del ARN del VHC, especialmente para poblaciones remotas y marginadas.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un ensayo rentable, rápido y sensible para la detección de ARN del virus de la Hepatitis C (VHC).
• Mejorar el cribado y diagnóstico del VHC, particularmente en poblaciones desatendidas.

Principales métodos:

• Extracción de ARN de plasma seguida de transcripción inversa y amplificación isotérmica mediada por bucle (RT-LAMP).
• Amplificación del ARN del VHC utilizando cebadores específicos y detección mediante CRISPR-Cas12b con lectura de fluorescencia.

Principales resultados:

• El ensayo detectó ARN del VHC en los genotipos 1a, 1b, 2, 3a y 4 con alta sensibilidad y especificidad.
• El límite inferior de detección (LLOD) para el genotipo 2 fue de 250 copias/ml; para muestras clínicas (genotipo 1), fue de ≥100 UI/ml en 45 minutos.
• La sensibilidad clínica fue del 100% en 72 muestras de pacientes (incluyendo VHC agudo y coinfecciones), con una especificidad del 100% en 33 muestras negativas.

Conclusiones:

• El ensayo desarrollado demuestra alta especificidad y sensibilidad para la detección directa de ARN del VHC a partir de plasma.
• La prueba proporciona resultados en 45 minutos, lo que permite un cribado y diagnóstico eficientes de la infección por VHC a nivel mundial.