Editores de bases mediadas por CRISPR de un solo componente para Agrobacterium y su uso para desarrollar un conjunto...

Área de la Ciencia:

• Microbiología
• Biotecnología Vegetal
• Biología Molecular

Sus antecedentes:

• La transformación de plantas mediada por Agrobacterium depende de linajes de cepas específicos como C58 y Ach5.
• Los derivados existentes de C58 y Ach5 (EHA105, GV3101::pMP90, LBA4404) son valiosos pero limitados.
• Las cepas hipervirulentas K599 y Chry5 están infrautilizadas debido a la inaccesibilidad de variantes desarmadas.

Objetivo del estudio:

• Expandir el repertorio de cepas de Agrobacterium para la transformación vegetal.
• Crear variantes desarmadas de las cepas hipervirulentas infrautilizadas K599 y Chry5.
• Introducir auxotrofía y deficiencia de recombinación en cepas nuevas y existentes de Agrobacterium.

Principales métodos:

• Se generó auxotrofía de timidina y deficiencia de recombinación utilizando la edición de bases mediada por CRISPR de los genes thyA y recA.
• Se introdujeron mutaciones de pérdida de función a través de mutaciones sin sentido en codones susceptibles.
• Se desarrollaron vectores de editores de bases de un solo componente marcados visualmente y un plugin de wrapper de Geneious Prime para el filtrado de guías.

Principales resultados:

• Se produjeron con éxito versiones desarmadas de Agrobacterium rhizogenes K599 y Agrobacterium tumefaciens Chry5.
• Se introdujeron mutaciones thyA y recA en derivados de C58 y Ach5, así como en las nuevas cepas K599 y Chry5.
• Se crearon herramientas simplificadas basadas en CRISPR para la ingeniería eficiente de cepas.

Conclusiones:

• Las nuevas cepas de Agrobacterium y el flujo de trabajo simplificado de edición de bases mejoran las capacidades de transformación de plantas.
• Estos avances facilitarán la creación de futuros derivados de cepas de Agrobacterium.
• El estudio apoya a la comunidad de transformación de plantas en general con recursos y metodologías mejorados.