Un sistema simple, ultraestable y rentable de eliminación de oxígeno para imágenes de larga duración con DNA-PAINT

Área de la Ciencia:

• Biofísica
• Microscopía
• Biología Molecular

Sus antecedentes:

• DNA-PAINT es una técnica de superresolución que permite la obtención de imágenes a nanoescala.
• Se basa en la hibridación transitoria de ADN, ofreciendo resistencia a la fotodegradación.
• La obtención de imágenes extendida está limitada por las especies reactivas de oxígeno (ROS) que dañan las estructuras del ADN.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un sistema robusto y sin enzimas de eliminación de oxígeno (OSS) para DNA-PAINT.
• Superar las limitaciones de los OSS enzimáticos actuales, como la degradación y la reducción del rendimiento.
• Mejorar la estabilidad y la rentabilidad de las imágenes de DNA-PAINT a largo plazo.

Principales métodos:

• Formulación de un tampón sin enzimas que combina sulfito de sodio (Na2SO3) y Trolox (SST).
• Prueba de la preservación de la integridad de la cadena de acoplamiento de ADN durante períodos prolongados (más de 24 horas).
• Evaluación del impacto del tampón SST en el rendimiento y la estabilidad de las imágenes de DNA-PAINT.

Principales resultados:

• El tampón SST preserva eficazmente la integridad de la cadena de acoplamiento durante más de 24 horas.
• Mejora significativamente el rendimiento de las imágenes de DNA-PAINT a largo plazo.
• SST demuestra una mejora de diez veces en la estabilidad del tampón, la facilidad de preparación y una reducción de costos de más del 90%.

Conclusiones:

• El tampón SST sin enzimas proporciona un OSS robusto, rentable y de alto rendimiento para DNA-PAINT.
• Esta formulación supera las limitaciones de los OSS enzimáticos, permitiendo la obtención de imágenes de superresolución extendida.
• SST ofrece una solución práctica para mejorar la fiabilidad y la accesibilidad de la microscopía DNA-PAINT.