Aplicación de la microscopía de iluminación estructurada correlativa 3D y la tomografía de rayos X para caracterizar...

Área de la Ciencia:

• Virología
• Biología Celular
• Microscopía

Sus antecedentes:

• El ensamblaje del virus del herpes simple-1 (VPH-1) involucra numerosos genes virales con funciones poco comprendidas.
• Estudios previos carecían de microscopía de luz correlativa para identificar componentes virales específicos durante la morfogénesis viral.

Objetivo del estudio:

• Investigar la función y la importancia relativa de las proteínas virales en el ensamblaje del VPH-1.
• Caracterizar las funciones de las proteínas virales en la salida nuclear y el envolvimiento citoplasmático utilizando imágenes correlativas.

Principales métodos:

• Se utilizó microscopía de iluminación estructurada criogénica (cryoSIM) y tomografía criogénica de rayos X blandos (cryoSXT) correlativas.
• Se examinaron proteínas de capside fluorescente (eYFP-VP26) y de envoltura (gM-mCherry) en nueve mutantes fluorescentes de VPH-1.
• Se comparó la importancia de las proteínas virales en las etapas de salida nuclear y envolvimiento citoplasmático.

Principales resultados:

• Clasificó la importancia de cinco proteínas virales para la salida nuclear (pUL34 >pUL21>VP16>pUL16>pUS3).
• Identificó funciones para cinco proteínas virales en el envolvimiento citoplasmático, incluida la VP16 en la entrega de capside.
• Observó características novedosas de la detención del envolvimiento y cúmulos de partículas virales citoplasmáticas en mutantes que carecen de pUL11, pUL51, gK y gE.

Conclusiones:

• Las imágenes 3D correlativas proporcionan nuevas perspectivas sobre las funciones de las proteínas virales y la morfogénesis del VPH-1.
• Se estableció que el envolvimiento del VPH-1 ocurre a través de la brotación de partículas, no por envoltura.
• Se destacó la utilidad de la imagen correlativa 3D tomográfica como una tecnología emergente en la investigación de virología.