Desarrollo y validación de una metodología basada en células para evaluar la afinidad relativa de filgrastim al...

Área de la Ciencia:

• Bioquímica
• Farmacología
• Biología Celular

Sus antecedentes:

• Filgrastim trata la neutropenia uniéndose al receptor del factor estimulante de colonias de granulocitos.
• Los métodos de caracterización actuales a menudo pasan por alto la afinidad filgrastim-receptor, basándose únicamente en ensayos de proliferación.
• La evaluación de la afinidad de unión al receptor es crucial para la evaluación integral de los productos terapéuticos proteicos.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar y validar un ensayo colorimétrico basado en células para determinar la afinidad relativa de unión al receptor de filgrastim.
• Establecer un método más completo para la caracterización y las pruebas de comparabilidad de filgrastim.
• Proporcionar una alternativa a los ensayos de proliferación para evaluar la actividad biológica de filgrastim.

Principales métodos:

• Se utilizó un ensayo colorimétrico basado en células utilizando células de leucemia mieloide murina que expresan el receptor G-CSF.
• Se determinó la afinidad de unión relativa de filgrastim a su receptor.
• Se realizó un riguroso ejercicio de validación para evaluar el rendimiento del ensayo.

Principales resultados:

• El método desarrollado demostró precisión, especificidad y linealidad dentro de un rango de afinidad del 75-130%.
• Se confirmó la precisión con un intervalo de confianza del 93,6-114,2% y un coeficiente de variación del 12,6%.
• El ensayo cuantificó con éxito la afinidad relativa de unión al receptor.

Conclusiones:

• El método propuesto basado en células es una alternativa viable para evaluar la actividad biológica de filgrastim a través de la afinidad del receptor.
• Este ensayo es adecuado para su inclusión en estudios de caracterización biológica y comparabilidad de filgrastim.
• El método ofrece una evaluación más completa de filgrastim en comparación con los ensayos de proliferación por sí solos.