Fosforilación de Shiftless es importante para inhibir el cambio programado de -1 ribosomal

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular
• Biología Estructural
• Virología

Sus antecedentes:

• Shiftless (SFL) es un inhibidor conocido del cambio programado de -1 ribosomal (-1 PRF).
• SFL demuestra actividades antivirales de amplio espectro.
• Comprender el mecanismo de SFL es clave para desarrollar nuevas estrategias antivirales.

Objetivo del estudio:

• Caracterizar la proteína humana Shiftless (SFL) estructural y bioquímicamente.
• Elucidar el papel del bucle de hiperfosforilación (HPL) de SFL en su función.
• Identificar las quinasas celulares que regulan la actividad de SFL.

Principales métodos:

• Cristalografía de rayos X para determinar la estructura 3D de SFL.
• Ensayos bioquímicos para medir la afinidad de unión al ARN.
• Biotinilación dependiente de proximidad para identificar quinasas que interactúan con SFL.

Principales resultados:

• La estructura cristalina de SFL reveló un módulo único en forma de bote con un bucle de hiperfosforilación (HPL) que contiene cuatro residuos fosforilados.
• SFL se une a la secuencia -1 PRF del VIH-1 con afinidad nanomolar (KD = 5.7 nM).
• La interrupción de la fosforilación de HPL redujo la unión al ARN y la actividad antiviral de SFL, identificándose EEF2K, NEK9 y PBK como quinasas de SFL.

Conclusiones:

• La estructura de SFL, en particular el HPL, es fundamental para su unión al ARN y su función inhibidora de -1 PRF.
• La fosforilación por quinasas específicas (EEF2K, NEK9, PBK) regula la actividad de SFL.
• Estos hallazgos proporcionan información mecanicista sobre el papel antiviral de SFL.