Método HPLC de doble ruta de flujo para la cuantificación optimizada en el tiempo de clases de metabolitos...

Área de la Ciencia:

• Química Analítica
• Bioquímica
• Cromatografía

Sus antecedentes:

• Los estudios biomédicos requieren el análisis de diversos analitos con propiedades variables.
• Los métodos analíticos únicos a menudo tienen dificultades para detectar múltiples analitos de manera eficiente.
• Los enfoques multimetodológicos actuales consumen mucho tiempo.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un método de cromatografía líquida-espectrometría de masas (LC-MS) optimizado en el tiempo.
• Permitir el análisis paralelo de ácidos grasos de cadena corta (SCFA) y aminas del suero humano.
• Reducir el tiempo total de análisis de muestras manteniendo el rendimiento analítico.

Principales métodos:

• Se utilizó un solo espectrómetro de masas con cromatografía líquida de interacción hidrofílica (HILIC) y HPLC en fase reversa (RP) en paralelo.
• Se empleó una válvula de seis puertos y un muestreador de doble división para la reequilibración simultánea de columnas.
• Se derivatizaron los SCFA para mejorar la separación por HPLC en fase reversa y la ionización por electrospray; se analizaron las aminas en forma nativa a través de HILIC.

Principales resultados:

• Se logró una reducción del 37% en el tiempo de análisis en comparación con los métodos individuales.
• Se demostró una cuantificación robusta y reproducible en muestras de suero humano (RSD ≤ 5,8%).
• Se mantuvieron tiempos de retención estables y resoluciones cromatográficas tanto para los análisis de SCFA como de aminas.

Conclusiones:

• El enfoque paralelo de HPLC en fase reversa y HILIC con un solo MS es muy eficiente.
• Este método permite condiciones cromatográficas personalizadas para lotes extensos de muestras.
• Optimización de la utilización del detector y el rendimiento de la separación para diversos analitos.