Mutagénesis de escaneo cargado como un enfoque de alto rendimiento para el mapeo de epítopos

Área de la Ciencia:

• Virología
• Inmunología
• Bioquímica

Sus antecedentes:

• La identificación de epítopos neutralizantes es crucial para el desarrollo de vacunas eficaces e inhibidores antivirales.
• Las sustituciones de residuos cargados (por ejemplo, ácido aspártico, arginina) son bien toleradas en posiciones antigénicas expuestas y tienen un impacto mínimo en la estabilidad de las proteínas.
• Dichas sustituciones en residuos de epítopos pueden alterar significativamente la unión a socios afines.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar y validar un método rápido para el mapeo de epítopos utilizando mutagénesis de escaneo cargado con códigos de barras.
• Identificar epítopos neutralizantes dirigidos por sueros políclonales contra inmunógenos de SARS-CoV-2.
• Acelerar el desarrollo de vacunas e inhibidores mejorando la identificación de sitios de interacción.

Principales métodos:

• Exhibición en superficie de levadura de bibliotecas de mutagénesis de escaneo cargado con códigos de barras.
• Cribado mediante citometría de flujo combinada con secuenciación profunda.
• Construcción de una biblioteca de escaneo de aspartato para el dominio de unión al receptor de SARS-CoV-2, con cada mutación vinculada a un código de barras único.

Principales resultados:

• El método desarrollado mapeó con éxito epítopos dirigidos en ratones inmunizados con inmunógenos de SARS-CoV-2.
• La mutagénesis de escaneo cargado con códigos de barras utiliza bibliotecas con una diversidad >50 veces menor en comparación con los escaneos mutacionales completos.
• El enfoque facilita la construcción de bibliotecas, el cribado, el análisis posterior y la multiplexación de muestras.

Conclusiones:

• Este enfoque de mutagénesis de escaneo cargado con códigos de barras ofrece un método más rápido y eficiente para el mapeo de epítopos.
• La técnica acelera la identificación de sitios de interacción críticos en antígenos virales.
• Este avance tiene un potencial significativo para acelerar el desarrollo de vacunas e inhibidores contra patógenos virales.