Una nueva herramienta de diagnóstico para el virus del Nilo Occidental linaje 1a y 2 utilizando un sistema...

Área de la Ciencia:

• Diagnóstico Molecular
• Virología
• Biotecnología

Sus antecedentes:

• El virus del Nilo Occidental (WNV) es un patógeno de importancia mundial transmitido por mosquitos Culex.
• La neuroinvasión por WNV (WNND) presenta altas tasas de letalidad, lo que enfatiza la necesidad de un diagnóstico temprano debido a la ausencia de tratamientos y vacunas.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar herramientas de diagnóstico rápidas, sensibles y específicas para el virus del Nilo Occidental (WNV).
• Evaluar los sistemas DETECTR basados en CRISPR (reportero CRISPR dirigido por endonucleasa de ADN) integrados con amplificación isotérmica para la detección de WNV.

Principales métodos:

• Diseño e implementación de un ensayo DETECTR WNV de 2 pasos que utiliza transcripción inversa-recombinación de polimerasa (RT-RPA).
• Desarrollo de un ensayo DETECTR WNV de 1 paso para un procesamiento simplificado en un solo tubo.
• Optimización de un método DETECTR WNV de 1 paso con filtro para reducir el tiempo de procesamiento.
• Evaluación del kit Punch-it™ NA-Sample para la lisis de muestras en comparación con otros métodos.

Principales resultados:

• El DETECTR WNV de 2 pasos detectó hasta 1.0 × 10^2 copias de ARN para los linajes 1a y 2 del WNV, con una sensibilidad comparable a la qRT-PCR y sin reactividad cruzada.
• El DETECTR WNV de 1 paso logró límites de detección de 1.0 × 10^3 copias de ARN.
• El DETECTR WNV de 1 paso con filtro mostró límites de detección comparables al método de 2 pasos y al mismo tiempo redujo el tiempo del ensayo.
• El kit Punch-it™ NA-Sample demostró ser eficaz para la preparación rápida de muestras.

Conclusiones:

• Los métodos DETECTR basados en CRISPR-Cas12a ofrecen una alternativa prometedora para el diagnóstico de WNV, proporcionando alta especificidad y sensibilidad.
• Estos métodos son adecuados para diagnósticos de campo, superando potencialmente las limitaciones financieras y técnicas de las herramientas convencionales.
• Los ensayos desarrollados facilitan procesos rápidos y sencillos de amplificación y detección de WNV.