Purificación de oligonucleótidos antisentido mediante cromatografía de interacción hidrofóbica

Área de la Ciencia:

• Bioquímica
• Ingeniería Química
• Cromatografía

Sus antecedentes:

• Los métodos tradicionales como la cromatografía de intercambio aniónico (AEX) y de fase reversa enfrentan limitaciones en la eliminación de impurezas para oligonucleótidos antisentido.
• Las impurezas relacionadas con el proceso (disolventes, moléculas pequeñas) y las impurezas relacionadas con el producto (por ejemplo, N-1, P=O1, branchmers) plantean desafíos en la purificación de oligonucleótidos.

Objetivo del estudio:

• Evaluar la cromatografía de interacción hidrofóbica (HIC) como método alternativo de control de impurezas para la purificación de oligonucleótidos antisentido.
• Optimizar los parámetros de HIC para maximizar el rendimiento y la resolución de impurezas en la síntesis de oligonucleótidos.

Principales métodos:

• Evaluación sistemática de variables de HIC, incluyendo ligando de resina, tipos de sal, condiciones de procesamiento, tipos de gradiente y relaciones de carga.
• Optimización de la carga de la columna (32%-78% DBC) y uso de gradientes de lavado y elución por pasos.
• Desorción del producto purificado utilizando bajas concentraciones de sal liotrópica (≤50 mM) y gradientes por pasos.

Principales resultados:

• La HIC eliminó eficazmente los disolventes y las moléculas pequeñas relacionados con el proceso en ≥3 log10 y las secuencias de fallo (EEI) en ≥90%.
• La HIC demostró una reducción significativa de impurezas difíciles relacionadas con el producto, como los branchmers (LEI), las impurezas N-1 y las impurezas P=O1.
• La HIC optimizada logró un rendimiento del 90% y una resolución máxima de impurezas, reteniendo las impurezas no polares (LEI) en la columna.

Conclusiones:

• La HIC es un método de purificación potente, totalmente acuoso, escalable y rentable para oligonucleótidos antisentido.
• La HIC se puede utilizar como una técnica independiente o integrarse con métodos ortogonales como AEX para mejorar la pureza.
• Los procesos de HIC diseñados adecuadamente proporcionan productos de oligonucleótidos predecibles y de alta pureza.