Un método eficaz para mejorar la expresión génica transitoria mediante la transfection de células CHO de alta...

Área de la Ciencia:

• Biotecnología
• Biología Molecular
• Biología Celular

Sus antecedentes:

• Las células de ovario de hámster chino (CHO) se utilizan ampliamente para la producción de proteínas recombinantes.
• La expresión génica transitoria (TGE) ofrece una alternativa más rápida a la expresión génica estable (SGE), pero a menudo sufre bajos rendimientos de proteínas.

Objetivo del estudio:

• Optimizar los sistemas de expresión génica transitoria (TGE) en células CHO para mejorar la producción de proteínas recombinantes.
• Mejorar los rendimientos de proteínas en TGE optimizando los elementos del vector y las condiciones de transfection.

Principales métodos:

• Se diseñaron elementos regulatorios del vector (Kozak, polyA, intrones, líder) y se optimizaron las condiciones de transfection para la transfection en suspensión de alta densidad.
• Se utilizó polietilenimina (PEI) de 40 kDa para la transfection.
• Se identificó la concentración óptima de ADN (4 µg/mL), la relación en masa ADN:PEI (1:5) y se empleó una estrategia de transfection repetida.

Principales resultados:

• Se logró una eficiencia de transfection del 76,34 % con una viabilidad celular superior al 85 %.
• Aumento de los niveles de EGFP y SEAP en 5,33 y 4,13 veces, respectivamente.
• Mejora de la producción de proteínas terapéuticas, incluido el colágeno humano recombinante tipo III (4,86 veces) y la albúmina sérica humana (5,50 veces).

Conclusiones:

• La transfection en suspensión de alta densidad aumenta significativamente la expresión transitoria de proteínas recombinantes en células CHO.
• El enfoque optimizado mejora la eficiencia de la transfection, amplía la población de células recombinantes y mantiene una alta viabilidad celular.
• Este método presenta una estrategia prometedora para la expresión transitoria de transgenes de alto rendimiento.