Un protocolo optimizado e integral para la generación y el análisis multiómico de macrófagos derivados de monocitos...

Área de la Ciencia:

• Inmunología
• Biología celular
• Biotecnología

Sus antecedentes:

• Los macrófagos son células inmunitarias cruciales con diversos papeles en la defensa y la reparación de tejidos.
• Los fenotipos de los macrófagos humanos son muy plásticos, influenciados por las señales ambientales y los estados de activación (similares a M1 y M2).
• Se necesitan protocolos estandarizados para la investigación reproducible de macrófagos humanos, especialmente utilizando células criopreservadas.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar y caracterizar rigurosamente un protocolo integral para la diferenciación de monocitos humanos en macrófagos a partir de células mononucleares de sangre periférica (PBMCs) congeladas.
• Evaluar el impacto de diversas condiciones de diferenciación y polarización en el fenotipo de los macrófagos.
• Establecer un método optimizado para análisis multiómicos, incluida la secuenciación de ARN de núcleo único (snRNA-seq).

Principales métodos:

• Aislamiento de monocitos de PBMCs congelados seguido de diferenciación en macrófagos.
• Aplicación de estímulos de polarización distintos M1 (LPS, IFNγ) y M2 (IL-4, IL-13).
• Caracterización integral mediante perfilado de citoquinas y transcriptómica.
• Evaluación de la estabilidad del fenotipo inmunitario después de la eliminación del estímulo (experimentos de despolarización).
• Aislamiento de núcleos para snRNA-seq a partir de macrófagos adherentes.

Principales resultados:

• Se estableció un protocolo detallado para la diferenciación y polarización de macrófagos humanos a partir de PBMCs congelados.
• Se caracterizó el impacto de las concentraciones y duraciones de estímulos específicos en la polarización M1/M2.
• Se evaluó la estabilidad del fenotipo de los macrófagos durante las 72 horas posteriores a la estimulación.
• Se realizó con éxito snRNA-seq en núcleos aislados directamente de macrófagos cultivados.

Conclusiones:

• El protocolo desarrollado proporciona un método estandarizado y reproducible para generar macrófagos humanos a partir de PBMCs criopreservados.
• Este enfoque facilita estudios sistemáticos de la biología de los macrófagos utilizando material de biobanco.
• El protocolo permite análisis multiómicos avanzados, apoyando el desarrollo de terapias celulares y la investigación en inmunología fundamental.