Multiplexed Pan Soluble Ligandome Assaying via OASIS

Área de la Ciencia:

• Biología celular
• Biología molecular
• Biotecnología

Sus antecedentes:

• El cribado de ligandos de proteínas solubles es crucial para comprender la señalización celular y el descubrimiento de fármacos.
• Los métodos actuales requieren formatos en hileras debido a efectos no autoctonos de la difusión de ligandos.
• Existe una necesidad de ensayos combinados multiplexados de ligandos.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar una plataforma novedosa, Obligate Autocrine Signaling In Situ Screening (OASIS), para el cribado combinado de ligandos de proteínas solubles.
• Permitir la señalización exclusivamente autocrina anclando ligandos a la superficie celular de expresión.
• Acelerar la interrogación funcional del ligandoma humano.

Principales métodos:

• Se desarrolló OASIS utilizando la entrega lentiviral de ligandos genéticamente codificados fusionados a un dominio de anclaje.
• Se anclaron proteínas a la membrana externa de la célula de expresión para forzar la señalización autocrina.
• Se validó OASIS con IFNA2 y EGF, y se realizó un cribado de aptitud de ligandoma completo en hiPSC, seguido de Perturb-Seq de célula única.

Principales resultados:

• OASIS demostró una señalización autocrina sin comprometer con una actividad paracrina significativamente reducida.
• Una detección de ligandoma completo identificó potentes factores de autorrenovación, incluidos ligandos de la familia FGF.
• Perturb-Seq de célula única mapeó la remodelación transcripcional inducida por la biblioteca de ligandoma.

Conclusiones:

• OASIS es una plataforma que permite el ensayo combinado de ligandos solubles al forzar la señalización autocrina.
• La plataforma se validó ensayando todos los ligandos humanos en hiPSC, midiendo el impacto en la aptitud y la transcripción.
• OASIS facilita la interrogación rápida de ligandos y anticuerpos diseñados para estudios de señalización celular.