Evaluación del flujo de trabajo ForenSeq™ MainstAY para muestras de ADN forense

Área de la Ciencia:

• Ciencia Forense
• Biología Molecular
• Genética

Sus antecedentes:

• El kit ForenSeq™ MainstAY en el sistema de secuenciación MiSeq FGx® está aprobado para su uso en el Sistema Nacional de Índice de ADN (NDIS).
• Evaluar su rendimiento es crucial para los laboratorios forenses.

Objetivo del estudio:

• Evaluar de forma integral el rendimiento y las limitaciones de la química ForenSeq™ MainstAY.
• Proporcionar orientación práctica para los laboratorios forenses que adopten este kit.

Principales métodos:

• Se realizaron estudios de rendimiento base, sensibilidad y reproducibilidad.
• Se analizaron muestras de casos desafiantes, comparando diferentes métodos de preparación de bibliotecas, tampones de PCR y tipos de celdas de flujo.
• Se realizaron comparaciones con la electroforesis capilar (CE).

Principales resultados:

• El kit demostró alta fiabilidad y rendimiento constante entre usuarios, con una mínima pérdida de loci hasta 62 pg.
• Superó a la CE en muestras de bajo rendimiento y degradadas.
• Se observaron limitaciones a plexidades más altas, y un mayor número de muestras redujo las lecturas en muestras degradadas.

Conclusiones:

• El kit ForenSeq™ MainstAY es fiable para el análisis de ADN forense, especialmente para muestras desafiantes.
• Los ajustes estratégicos en el flujo de trabajo, como la agrupación de muestras degradadas o la reducción de la plexidad, pueden mitigar las limitaciones de rendimiento.
• La preparación automatizada de bibliotecas mostró resultados comparables o mejorados sin contaminación cruzada.