Desbloqueo de la edición CRISPR-Cas9 para especies diversas de Dictyostélidos

Área de la Ciencia:

• Biología Molecular
• Genética
• Biología Evolutiva

Sus antecedentes:

• Los Dictyostélidos son mohos mucilaginosos celulares que habitan en el suelo y se han estudiado durante más de un siglo.
• Los métodos limitados de edición genómica han restringido la investigación a una sola especie, Dictyostelium discoideum, lo que dificulta los estudios comparativos.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un sistema de edición genética CRISPR-Cas9 novedoso, eficiente y ampliamente aplicable para Dictyostélidos.
• Permitir la edición genómica en especies de Dictyostélidos previamente inaccesibles a tales métodos.

Principales métodos:

• Un enfoque de edición genética CRISPR-Cas9 sin clonación y sin selección.
• Aplicación del método en especies de Dictyostélidos filogenéticamente distantes.
• Se utilizó la clasificación de células individuales y la microscopía de fluorescencia para el aislamiento y análisis de mutantes.

Principales resultados:

• Se lograron altas eficiencias de knock-out (hasta 90%) y knock-in (hasta 50%) sin marcadores selectivos.
• Permitió el aislamiento de mutantes tan pronto como un día después de la transfección.
• Se aplicó con éxito la edición CRISPR-Cas9 a especies que nunca antes habían sido editadas genómicamente.

Conclusiones:

• El sistema CRISPR-Cas9 desarrollado es altamente eficiente, rápido y versátil para la investigación de Dictyostélidos.
• Este método supera las limitaciones anteriores, permitiendo interrogaciones genéticas a gran escala en todo el clado de Dictyostélidos.
• Abre nuevas vías para la genómica comparativa y los estudios funcionales en diversas especies de mohos mucilaginosos.