Método simple de LC-UV de fase reversa con apareamiento de iones para la cuantificación relativa de especies de...

Área de la Ciencia:

• Bioquímica
• Química Analítica
• Biología Molecular

Sus antecedentes:

• El capping 5' del ARN mensajero (ARNm) es crucial para la eficacia, estabilidad y seguridad de las terapias y vacunas.
• Los métodos analíticos existentes, como la espectrometría de masas (MS), son a menudo caros, complejos e inadecuados para el control de calidad (QC) de rutina.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un método analítico simple, robusto y compatible con QC para cuantificar las estructuras de cap 5' del ARNm.
• Proporcionar una alternativa práctica a los flujos de trabajo basados en MS para el análisis de ARNm.

Principales métodos:

• Desarrollo de un método de cromatografía líquida de fase reversa con detección UV (IP-RPLC-UV) con apareamiento de iones.
• Se utilizó la escisión dirigida del extremo 5' mediante hibridación de oligos y digestión con RNase H.
• Se empleó un cribado sistemático de reactivos de apareamiento de iones y diseño de experimentos para la optimización.

Principales resultados:

• Se logró una resolución de línea base de especies sin capar, Cap 0, Cap 1, Cap G y +G en menos de 20 minutos.
• Se identificó el butilamonio acetato como el reactivo de apareamiento de iones óptimo.
• Se demostró la sensibilidad del método con un límite de cuantificación inferior de 0.01 mg/mL para especies sin capar y alta repetibilidad.

Conclusiones:

• Se introdujo el primer método IP-RPLC-UV específicamente para la cuantificación relativa de rutina de las estructuras de cap de ARNm.
• El método desarrollado ofrece una alternativa práctica, accesible y fiable para el control analítico de ARNm.
• Facilita la implementación de estrategias de QC robustas en el desarrollo de fármacos de ARNm.