Desarrollo de métodos analíticos de alto rendimiento para la caracterización y cuantificación de la integridad del...

Área de la Ciencia:

• Terapia génica
• Biología molecular
• Virología

Sus antecedentes:

• Los vectores de virus adenoasociado recombinante (rAAV) son clave en la terapia génica.
• El título del genoma viral (Vg) es el estándar para la potencia de rAAV, pero no refleja la integridad del genoma.
• Los genomas de rAAV son heterogéneos, contienen especies intactas y truncadas, lo que afecta la eficacia y la seguridad.

Objetivo del estudio:

• Abordar la falta de métodos fiables para evaluar la integridad del genoma de rAAV.
• Demostrar la desconexión entre el título tradicional de Vg y la actividad real de rAAV.
• Desarrollar un método novedoso y de alto rendimiento para cuantificar la integridad del genoma de rAAV.

Principales métodos:

• Se utilizaron múltiples vectores de rAAV y ensayos de imagen de alto rendimiento para mostrar la desconexión entre el título de Vg y la actividad.
• Se desarrolló un nuevo método de descubrimiento a escala meso (MSD) de captura de híbridos de ARN-ADN de alto rendimiento y multiplexación.
• Se cuantificaron los genomas de rAAV de cadena positiva y negativa, intactos frente a truncados, con alta sensibilidad y especificidad.

Principales resultados:

• Se demostró una desconexión significativa entre el título de Vg y la actividad de rAAV.
• El nuevo método MSD de captura de híbridos de ARN-ADN caracteriza con precisión la integridad del genoma de rAAV.
• Los datos de integridad generados se correlacionan en gran medida con la actividad de rAAV.

Conclusiones:

• El método desarrollado proporciona una medida cuantitativa fiable de la integridad del genoma de rAAV.
• Este método mejorará los estudios preclínicos/clínicos de terapia génica y el diseño de vectores.
• La técnica tiene aplicaciones más amplias para la cuantificación de ARN y ADN en diversos campos.