Ensayo de PCR digital de gotas para cuantificar Salmonella en muestras de carne

Área de la Ciencia:

• Microbiología de Alimentos
• Diagnóstico Molecular
• Ciencia de la Seguridad Alimentaria

Sus antecedentes:

• Salmonella es un importante patógeno transmitido por los alimentos que causa salmonelosis a nivel mundial.
• La cuantificación precisa de Salmonella es crucial para los criterios microbiológicos y las evaluaciones de riesgos.
• Los métodos tradicionales como el recuento en placa y el número más probable (NMP) consumen mucho tiempo y mano de obra.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar y validar un nuevo ensayo de PCR digital de gotas (ddPCR) para la cuantificación rápida y precisa de Salmonella.
• Evaluar el rendimiento del ensayo ddPCR en comparación con los métodos convencionales.

Principales métodos:

• Desarrollo de un ensayo ddPCR dirigido al gen invA de Salmonella.
• Validación de la especificidad, sensibilidad y límite de cuantificación del ensayo en muestras de carne.
• Comparación de los resultados de ddPCR con el recuento tradicional en placa y el modelado matemático de la cinética de crecimiento.

Principales resultados:

• El ensayo ddPCR demostró alta especificidad y sensibilidad.
• El límite de cuantificación se determinó en 1,1 × 10^2 unidades formadoras de colonias/mL en muestras de carne.
• Se observó una fuerte correlación lineal (R^2 > 0,99) entre las mediciones de ddPCR y el recuento en placa, con un alto coeficiente de correlación (0,996) en el modelado de la cinética de crecimiento.

Conclusiones:

• La PCR digital de gotas (ddPCR) es una alternativa viable y potente al método NMP para la cuantificación de Salmonella.
• El ensayo ddPCR desarrollado proporciona una herramienta rápida, específica y sensible para la evaluación cuantitativa de riesgos en la seguridad alimentaria.