Detección de Pasteurella multocida basada en RPA-CRISPR/Cas12a: establecimiento y aplicación inicial

Área de la Ciencia:

• Microbiología Veterinaria
• Diagnóstico Molecular
• Manejo de Enfermedades del Ganado

Sus antecedentes:

• Pasteurella multocida (Pm) causa importantes enfermedades respiratorias y pérdidas económicas en ovejas.
• Los métodos de diagnóstico actuales para Pm suelen ser lentos, complejos y no desplegables en campo.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un ensayo de diagnóstico rápido, visual y sensible para Pasteurella multocida (Pm) en ovejas.
• Superar las limitaciones de las herramientas de diagnóstico existentes para la aplicación en campo.

Principales métodos:

• Se desarrolló un ensayo de diagnóstico que integra la amplificación por polimerasa con recombinasa (RPA) con la tecnología CRISPR/Cas12a.
• Se dirigió al gen kmt1 específico de Pm y se optimizaron los parámetros de reacción.
• Se validó la especificidad frente a patógenos respiratorios comunes y la sensibilidad utilizando diluciones de plásmidos.

Principales resultados:

• Se logró un límite de detección de 5 × 10⁻¹ copias/μL en 30 minutos.
• El ensayo RPA-CRISPR/Cas12a detectó Pm en el 40,20% de las muestras clínicas, 4,1 veces más que la PCR.
• Se demostró alta sensibilidad y especificidad para la detección de Pm.

Conclusiones:

• El ensayo RPA-CRISPR/Cas12a desarrollado proporciona un método rápido, sensible y sin instrumentos para la detección de Pm.
• Este ensayo es una herramienta prometedora para entornos clínicos de primera línea en la cría de ovejas.
• Facilita el diagnóstico y manejo oportunos de las infecciones por Pasteurella multocida en ovejas.