Desarrollo de un método de detección rápido y portátil para el virus de la moquillo canino basado en CRISPR-Cas13a

Área de la Ciencia:

• Virología Veterinaria
• Diagnóstico Molecular
• Biotecnología

Sus antecedentes:

• El virus de la moquillo canino (VMC) causa una enfermedad multiorgánica grave en carnívoros, afectando la salud y la economía global.
• El control eficaz requiere métodos de diagnóstico precisos, rápidos y fáciles de usar para la detección temprana.
• Las herramientas de diagnóstico actuales como la RT-PCR pueden consumir mucho tiempo y requerir equipo especializado.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar un ensayo de diagnóstico novedoso, altamente sensible y rápido para el virus de la moquillo canino (VMC).
• Optimizar la amplificación asistida por recombinasa (RAA) acoplada con CRISPR-Cas13a y la detección por flujo lateral (LFD) para la detección del VMC.
• Evaluar el rendimiento del ensayo desarrollado en términos de sensibilidad, especificidad y velocidad en comparación con los métodos existentes.

Principales métodos:

• Se estableció un novedoso ensayo RAA-CRISPR-Cas13a para la detección del VMC.
• Se optimizaron las concentraciones de ARN CRISPR (crRNA) y Cas13a para la detección por flujo lateral (LFD).
• Se validó el ensayo utilizando plásmidos de cDNA del VMC y muestras clínicas, comparando los resultados con la RT-PCR.

Principales resultados:

• El ensayo RAA-CRISPR-Cas13a-LFD demostró alta especificidad, sin reactividad cruzada contra otros patógenos caninos comunes.
• Se logró una sensibilidad tan baja como 10^2 copias/μL de plásmidos de cDNA del VMC.
• El ensayo, combinado con HUDSON, detectó el VMC en muestras clínicas en 1,5 horas, comparable al rendimiento de la RT-PCR.
• Los resultados se visualizaron mediante tiras de fluorescencia o flujo lateral, permitiendo el diagnóstico desplegable en campo.

Conclusiones:

• El método RAA-CRISPR-Cas13a-LFD desarrollado ofrece una herramienta de diagnóstico sensible, específica y rápida para el VMC.
• Este ensayo tiene un potencial significativo para pruebas en el punto de atención (POCT) en entornos veterinarios.
• La tecnología puede ayudar en la prevención y el control eficaces del VMC, reduciendo las pérdidas económicas.