Evaluación comparativa de métodos de enriquecimiento de lisosomas: una guía para la investigación y la traslación...

Área de la Ciencia:

• Biología Celular; Bioquímica; Proteómica

Sus antecedentes:

• Los lisosomas son orgánulos cruciales en las funciones celulares y la patogénesis de enfermedades.; La baja abundancia de lisosomas requiere enriquecimiento para un análisis downstream efectivo, particularmente proteómica.; Los métodos existentes de aislamiento de lisosomas carecen de comparaciones sistemáticas y multimodales de rendimiento.

Objetivo del estudio:

• Evaluar sistemáticamente cuatro técnicas comunes de enriquecimiento de lisosomas.; Evaluar métodos basados en rendimiento, pureza, integridad de membrana, reproducibilidad, escalabilidad y contaminación cruzada.; Proporcionar orientación para la selección de estrategias óptimas de enriquecimiento de lisosomas para aplicaciones de investigación y clínicas.

Principales métodos:

• Evaluación comparativa de cuatro técnicas de enriquecimiento de lisosomas (basada en gradiente, basada en filtro, basada en perlas, fraccionamiento subcelular) utilizando células THP-1.; Evaluación multimodal utilizando análisis de seguimiento de nanopartículas, microscopía electrónica, citometría de flujo, Western blot y proteómica basada en espectrometría de masas.; Evaluación de métricas clave de rendimiento que incluyen rendimiento, pureza, integridad, reproducibilidad, escalabilidad y contaminación.

Principales resultados:

• Los métodos basados en gradiente y en perlas demostraron un enriquecimiento lisosomal y una pureza proteómica superiores.; El fraccionamiento subcelular produjo un mayor número de lisosomas pero exhibió una mayor variabilidad y contaminación.; Los métodos basados en filtros permitieron un procesamiento rápido pero aislaron principalmente lisosomas no intactos con contaminación cruzada significativa.

Conclusiones:

• Existen diferencias sustanciales de rendimiento entre los métodos de enriquecimiento de lisosomas, lo que afecta los análisis posteriores.; Se recomiendan los métodos basados en gradiente y en perlas para proteómica lisosomal de alta pureza.; El estudio subraya la importancia de una validación rigurosa para la investigación lisosomal, guiando la selección de métodos en función de los objetivos específicos.