Microscopía de Fluorescencia de Hoja de Luz y Análisis Automatizado de Imágenes 3D para el Rastreo Cuantitativo de...

Área de la Ciencia:

• Imagen Biomédica
• Biología del Desarrollo
• Biología Celular

Sus antecedentes:

• La microscopía de fluorescencia de hoja de luz (LSFM) permite la obtención de imágenes 3D a gran escala, pero enfrenta desafíos para combinar la aclaración de tejidos, la inmunomarcación y la preservación de la señal de rastreo de linaje.
• El rastreo de linaje multicolor, como el rastreo Confetti, requiere métodos robustos para el análisis cuantitativo en entornos 3D complejos.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar y validar una canalización metodológica y analítica integral para el rastreo de linaje multicolor utilizando LSFM.
• Optimizar los protocolos para la aclaración de tejidos, la inmunomarcación y la adquisición de imágenes 3D para estudios de rastreo de linaje.
• Permitir el análisis cuantitativo de la distribución celular y la expansión clonal en compartimentos tisulares específicos.

Principales métodos:

• Se utilizó microscopía de iluminación selectiva de plano invertido de doble vista (diSPIM) para la obtención de imágenes 3D de alta resolución de córneas de ratón.
• Se desarrolló un protocolo para el procesamiento de tejidos, la inmunomarcación y el rastreo de linaje Confetti en células de la córnea que expresan Prrx1.
• Se creó una canalización de análisis de imágenes 3D para morfometría, distribución de marcadores Confetti y estimación de la expansión clonal, incluida la corrección de la fuga espectral.

Principales resultados:

• Se adquirieron con éxito imágenes 3D detalladas a nivel celular de la córnea de ratón.
• Se cuantificaron los números de células en las capas epitelial, del estroma y endotelial, junto con las dimensiones de la córnea.
• La canalización de análisis calculó con precisión la distribución del marcador Confetti y la expansión clonal, corrigiendo la fuga del canal espectral.

Conclusiones:

• La metodología y la canalización de análisis presentadas facilitan estudios avanzados de rastreo de linaje utilizando LSFM e inmunomarcación.
• Este enfoque proporciona un marco robusto para el análisis clonal cuantitativo en 3D.
• La canalización es adaptable para estudios de rastreo de linaje en varios órganos más allá de la córnea.