Las variantes de STAT3 causantes de enfermedades pueden ser discriminadas por una prueba funcional de citometría de...

Área de la Ciencia:

• Inmunología
• Genética
• Biología Molecular

Sus antecedentes:

• Las variantes de STAT3 están relacionadas con diversas inmunodeficiencias innatas a través de mecanismos dominantes negativos (DN), de ganancia de función (GOF) o de haploinsuficiencia (HI).
• La evaluación del impacto biológico de las variantes de STAT3 es compleja y a menudo requiere procedimientos experimentales extensos.

Objetivo del estudio:

• Desarrollar una prueba funcional única y confiable para variantes de STAT3 en células primarias de pacientes.
• Simplificar la caracterización de variantes de STAT3 causantes de enfermedades.

Principales métodos:

• Se reclutaron pacientes con variantes validadas de STAT3-DN, STAT3-GOF y STAT3-HI.
• Se evaluó la relación de inhibición mediada por IL-10 de la producción de TNF-α en células mononucleares de sangre periférica (PBMC) mediante citometría de flujo.
• Se optimizó el ensayo y se definieron los umbrales mediante análisis ROC-AUC.

Principales resultados:

• Las variantes STAT3-DN y STAT3-HI mostraron una inhibición significativamente disminuida de TNF-α, mientras que las variantes STAT3-GOF mostraron una inhibición aumentada en comparación con los controles sanos.
• El ensayo optimizado demostró una alta precisión en la discriminación entre los tipos de variantes de STAT3 y los controles sanos (ROC-AUC hasta 1).

Conclusiones:

• El ensayo de la relación de inhibición de TNFα mediada por IL-10 y dependiente de STAT3 en monocitos derivados de PBMC es un método sensible y específico.
• Esta prueba basada en citometría de flujo evalúa y diferencia eficazmente las variantes STAT3-DN, -GOF y -HI para uso en investigación y clínico.